El brote de Coronavirus que azota a toda la población desde hace meses se ha convertido en un problema grave a escala mundial y queremos por ello colaborar con los laboratorios que trabajan en la prevención y diagnóstico de la enfermedad en todo el país, poniendo a su disposición protocolos, reactivos, equipos y todo el material relacionado para que los profesionales del sector lleven a cabo su labor de la forma más eficiente posible.

1. TOMA DE MUESTRAS Y TRANSPORTE

La toma de muestras de pacientes potencialmente contagiados de COVID-19 debe ser realizada de forma rigurosa siguiendo los protocolos establecidos y usando los materiales adecuados para preservar tanto la seguridad del operario que las manipula, como la integridad de la muestra en todo momento, hasta su posterior procesamiento en el laboratorio de diagnóstico.
El medio de transporte viral de Corning es válido para la conservación de muestras de COVID-19, y en combinación con los tubos de transporte y los hisopos especiales para la toma de muestras orofaríngeas, aportan una solución completa para el transporte con seguridad de las muestras de SARS-CoV-2.

2. EXTRACCIÓN DE ARN VIRAL

Macherey Nagel dispone de varias opciones de kits para el aislamiento de ARN viral, utilizados y recomendados para el diagnóstico de COVID-19, por laboratorios de referencia de la OMS. Debido a la urgencia de la situación generada meses atrás y la necesidad de aumentar el número de pruebas diagnósticas, algunos laboratorios se vieron obligados al uso de productos sin certificación IVD.
Institute Pasteur Paris (Paris, France) NucleoSpin® Dx Virus

PROTOCOLO
National Institute of Health (Nonthaburi, Thailand) NucleoSpin® RNA Virus

PROTOCOLO

NUEVO! Kit de extracción NucleoMag® Dx Pathogen con certificación CE-IVD basado en la tecnología de bolas magnéticas, validado para flujos de trabajo de diagnóstico de SARS-CoV-2 y diseñado para su uso con hisopos orales, nasales y saliva.
Las siguientes características hacen de nuestro NucleoMag® Dx Pathogen el kit ideal para su uso en diagnóstico de SARS-CoV-2:
∙ Marca CE-IVD para su uso en diagnóstico
∙ Apto para uso manual o automatizado
∙ Compatible con las plataformas robóticas más conocidas del mercado: Eppendorf, Tecan, Hamilton, KingFisher, etc.
∙ App notes y scripts específicos para diferentes sistemas: Eppendorf epMotion 5075 and 5073, Tecan EVO 150 y Freedom EVO, Hamilton NIMBUS Presto o Genomic STARlet y KingFisher Flex entre otros.

3. MASTERMIX PARA LA AMPLIFICACIÓN Y DETECCIÓN DE ARN VÍRICO EN UN SOLO PASO

La nueva mastermix qPCRBIO Probe 1-Step Virus Detect está optimizada con una mezcla de alta concentración (4x) para la amplificación ultrasensible y de alto rendimiento de secuencias de ARN viral debido a su amplio rango de detección y sensibilidad, por lo que está especialmente indicada en la detección de SARS-CoV2

Esta mezcla de alta concentración permite al usuario partir de una cantidad de muestra más elevada para aumentar la sensibilidad analítica, incluso cuando se trabaja con reacciones de pequeño volumen. PCRBio ha desarrollado una nota técnica con el protocolo para optimizar el rendimiento de la reacción en muestras de SARS-CoV-2. Es compatible con todas las plataformas de PCR a tiempo real presentes actualmente en el mercado.

Descripción Referencia
qPCRBIO Probe 1-Step Virus Detect Lo-ROX qPCR K7PB25.51

PROTOCOLO
qPCRBIO Probe 1-Step Virus Detect Hi-ROX qPCR K7PB25.52

PROTOCOLO
qPCRBIO Probe 1-Step Virus Detect No-ROX qPCR K7PB25.53

PROTOCOLO
qPCRBIO Probe 1-Step Virus Detect Separate-ROX qPCR K7PB25.54

PROTOCOLO

El inhibidor de ARNasa RiboShield™ es una proteína recombinante que bloquea la actividad de una amplia gama de ribonucleasas para proteger el ARN de la degradación por ARNasas y es particularmente adecuado para la incorporación en pruebas de saliva para la detección del SARS-CoV-2.

4. OLIGONUCLEÓTIDOS PARA PCR Y qPCR

Síntesis de primers y sondas que permiten una detección rápida y específica por qPCR de COVID-19, como por ejemplo*.

Nombre Secuencia
2019-nCoV_N1-F GAC CCC AAA ATC AGC GAA AT
2019-nCoV_N1-R TCT GGT TAC TGC CAG TTG AAT CTG
2019-nCoV_N1-P YY-ACC CCG CAT TAC GTT TGG TGG ACC-BHQ1

*CDC protocol

Descripción Referencia Cantidad
Sonda de doble marcaje: Yakima Yellow-BHQ1, 40 nmol 18PB-DD640-004 1
Primer Forward con purificación RP-Cartridge-Gold™, 40 nmol 18PB-PRIMR-004 1
Primer Reverse con purificación RP-Cartridge-Gold™, 40 nmol 18PB-PRIMR-004 1

5. CONTROLES POSITIVOS

Aunque el genoma viral para el SARS-CoV-2 es de aprox. 30 Kb, los test de diagnóstico para virus respiratorios generalmente se dirigen a una pequeña región del genoma viral que suele ser de 80-150 pb. Como ejemplo, las tres pruebas de diagnóstico recomendadas por el Centro para el Control de Enfermedades de los EE. UU. (CDC) tienen solo 65, 67 y 72 nucleótidos.
Por lo tanto, el control positivo solo necesita cubrir los 80-150 nucleótidos que apuntan las pruebas de diagnóstico y puede ser sintetizado a través del servicio de síntesis custom de Horizon.
¿Cuál es el valor de usar un control de ARN sintético?

1. Determinar la funcionalidad de la prueba diagnóstica, es decir, que se amplificó el control.
2. Controlar el rendimiento de la mastermix de la RT-qPCR.

6. TERMOCICLADOR DE PCR EN TIEMPO REAL QTOWER³ G

Equipos para diagnóstico por PCR en tiempo real qTOWER con una elevada velocidad de calentamiento y alta precisión que permite acortar los tiempos de detección, a la vez que optimiza los recursos empleados en la lucha contra la enfermedad.
Termociclador de PCR en tiempo real de 96 pocillos y pantalla táctil 86844-00555-2

BROCHURE

7. MATERIAL PLÁSTICO PARA LA PCR Y QPCR

Amplia gama de consumibles (placas, tubos, tiras, selladores, etc.) compatibles con todos los termocicladores de tiempo real del mercado.

8. KITS DE NGS PARA CARACTERIZACIÓN DE SARS-COV-2

El panel de amplicones Swift Amplicon SARS-CoV-2 permite secuenciar el genoma completo del virus obteniendo una cobertura y calidad óptima, usando las plataformas de Illumina. Ver pdf

Desde Cultek hemos querido compartir esta pequeña guía que esperemos le sea de ayuda en la lucha contra la pandemia. Del mismo modo, le recordamos la importancia de revisar sus existencias y pedidos del material relacionado, ya que algunos de nuestros proveedores están experimentando una mayor demanda de material y necesitamos ser previsores y alertarles de la necesidad de aumentar la producción de cara para poder garantizar el suministro

Otros enlaces de interés:

Organización Mundial de la Salud
Centro para el control y prevención de enfermedades
Ministerio de Sanidad
Nature Research